貨號：wts1022 產(chǎn)品名稱： ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡檢測試劑盒，Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。在細胞發(fā)生凋亡時，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細胞核的變化，而此階段Propidium Iodide（PI）不能通過細胞膜。細胞壞死時，雖然也會發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻，但此時細胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進入細胞與細胞核中的核酸結(jié)合，發(fā)出紅色熒光。所以Annexin V-FITC（綠色熒光）常與鑒定細胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來區(qū)分凋亡細胞與死亡細胞。此試劑盒主要用于流式細胞儀。
操作步驟:  

 1. 調(diào)整待測細胞的濃度為 5×105-1×106個/ml 。 

 2. 取1ml 細胞，1000rpm ，4 ℃離心10 分鐘，棄上清。 

 3. 加入 1ml 預(yù)冷的PBS ，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm ，4 ℃離心10 分鐘，棄上清（對于貼壁細胞，先用

胰酶消化，再用PBS 洗滌）。 

 4. 重復(fù)步驟 3 兩次。 

 5. 將細胞重懸于 200μ l Binding Buffer 。 

 6. 加入 10 μ l Annexin V-FITC和10 μ l PI ，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15 分鐘  或4 ℃反應(yīng) 30 分鐘。 

 7. 加入 300 μl Binding Buffer ，在1 小時內(nèi)用流式細胞儀檢測。 

 8. 若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。  

注意事項:  

  為保證得到理想的實驗結(jié)果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。  

 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。  

 2.Annexin V-FITC和Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在保存與操作時請注意避光。  

 3.Propidium iodide（PI ）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。  

 4.在細胞洗滌的最后一步，請盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實驗結(jié)果。  

 5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進行 Annexin V-FITC 染色，上機前 5 分鐘再加

入PI 染色。 
 

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